Virtaus-sytometripurku
Virtaus-sytometrin anatomia
Sytometri on mikroskooppi, joka kieltäytyy katsomasta kuvaa. Se ohjaa soluja yhden kerrallaan laserin tarkennuksen ohi ja laskee fotonit tapahtumaa kohden, joten jokainen valinta laitteessa on oikeastaan valinta siitä, kuinka monta fotonia yksi solu voi tuottaa ennen kuin se poistuu säteestä. Valitse osa materiaaliluettelosta ja pudota se poikkileikkaukseen; jokainen parametri sisältää siihen liittyvät katalogiosanumeroiden tiedot.
- 1Valitse osa materiaaliluettelosta.
- 2Pudota se moduuliin tai napsauta korttia.
- 3Lue sen tehtävä, sen parametrit ja niiden takana olevat osanumerot.
Materiaaliluettelo
Jokainen osa, yksi optinen budjetti. Vedä kortti valokuvan päälle tai napsauta sitä - sen vieressä oleva paneeli täyttyy kyseisen osan parametreilla.
Vedä osa tähän tai napsauta materiaaliluettelossa olevaa korttia
Opetuskatsaus, ei kokoonpanopiirros. Vasemmalla laserit, niiden yläpuolella nesteiden virtaus, keskellä virtauskenno ja sen tutkimuspiste, oikealla suodin- ja detektorihylly, alhaalla hankintalevy.
Komponenttien paikat ovat opetuskaaviota, eivät kokoonpanopiirustusta: sijoitus ja räjäytyskuva ovat suuntaa antavia. Parametriarvot ovat linkitetyn spesifikaation arvoja.
Jokainen osa parametri kerrallaan
Interaktiivisessa näkymässä näkyvät samat numerot taulukoissa voit lukea, etsiä ja lainata.
405 nm violetti laseri Virityslähde
Asettaa kuinka monta fotonia violettimerkityt solu voi lähettää. Tärkeää ei ole otsikkoteho vaan teho, joka säilyy kuidussa, pysyykö se vakiona ajon aikana ja missä linja sijaitsee suhteessa suodattimiin: 405 nm:n 2 nm leveä linja siirtyy 0,3 nm per kelvin, joten kotelon lämpötila siirtää eksitaation väriaineen absorptioalueen ulkopuolelle kauan ennen kuin mikään optiikassa liikkuu.
| Keskiaallonpituus | 405 nm |
|---|---|
| Lähtöteho, CW | 70 mW |
| Tällä linjalla tarjottu teho | 70 mW | 80 mW |
| Spektrileveys (FWHM) | 2 nm tyypillinen |
| Aallonpituuden lämpötilakerroin | 0.3 nm/K |
| Kuitusäikeen halkaisija | 3 um |
| Numeerinen aukko | 0.13 |
| Liitin | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| Väriaineet, joille tämä linja on valittu | BV421, Pacific Blue, DAPI (esimerkkejä) |
| Tavalliset emissioikkunat | 450/50 nm, 525/50 nm (esimerkkejä) |
488 nm sininen laseri Virityslähde
Asettaa fotonibudjetin jokaiselle sinisellä valolla aktivoidulle kanavalle kerralla. Koska kolme ikkunaa jakaa yhden linjan, teho jakautuu niiden kesken ja himmeimmän väriaineen asettama raja määrittää speksin: katalogin 25 mW linja riittää hyvin merkitylle paneelille, ja kanavan rajoitus on yleensä suodatin ja ilmaisimen eikä laserin.
| Keskiaallonpituus | 488 nm |
|---|---|
| Lähtöteho, CW | 25 mW |
| Spektrileveys (FWHM) | 2 nm tyypillinen |
| Aallonpituuden lämpötilakerroin | 0.3 nm/K |
| Kuitusäikeen halkaisija | 3 um |
| Numeerinen aukko | 0.12 |
| Liitin | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| Väriaineet, joille tämä linja on valittu | FITC, Alexa Fluor 488, PE, PerCP (esimerkkejä) |
| Tavalliset emissioikkunat | 530/30 nm, 585/42 nm, 695/40 nm (esimerkkejä) |
638 nm punainen laseri Virityslähde
Asettaa, kuinka pitkälle kauas punaiseen paneeli voi yltää. Teknisissä tiedoissa mainitaan yleensä 640 nm linja; 638 nm on linja, jonka luettelo sisältää, ja se sijaitsee samassa absorptioalueessa, joten 640 nm:lle rakennettu suodattimien pino toimii muuttumattomana. Mitä punainen linja ei siedä, on tarpeeksi tumma ilmaisija: 660/20 ja 780/60 ikkunat ovat leveitä, ja kanavan rajoitus on ilmaisijan pimeävirta, ei excitointi.
| Keskiaallonpituus | 638 nm |
|---|---|
| Lähtöteho, CW | 70 mW |
| Tällä linjalla tarjottu teho | 70 mW | 100 mW |
| Spektrileveys (FWHM) | 2 nm tyypillinen |
| Aallonpituuden lämpötilakerroin | 0.3 nm/K |
| Kuitusäikeen halkaisija | 4 um |
| Numeerinen aukko | 0.13 |
| Liitin | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| Väriaineet, joille tämä linja on valittu | APC, Alexa Fluor 647, APC-Cy7 (esimerkkejä) |
| Tavalliset emissioikkunat | 660/20 nm, 780/60 nm (esimerkkejä) |
Kuidun toimitus Optinen polku
Asettaa mittauspisteen ja sen, ovatko kolme viivaa siellä samalla suoralla. Yhden tilan pigtailin lähtö on jo määritelty kuidulla: ytimen halkaisija ja numeerinen aukko määräävät hajonnan, ja käynnistysobjektiivi muuttaa sen solun virtauskennoon tarvittavaksi vyötäröksi. Jos kolme viivaa eivät ole samansuuntaisia muutaman mikrometrin tarkkuudella, yhden väriaineen merkitty solu saa eri kimmeltävän intensiteetin kuin toisen väriaineen merkitty solu.
| Linjat toimitettu | 405 / 488 / 638 nm |
|---|---|
| Kuitutyyppi | yksimuotoinen tila |
| Kuitusäikeen halkaisija | 3 um |
| Numeerinen aukko | 0.12 |
| Kuidun pituus | 100 cm (110 cm maks.) |
| Liitin | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| vähintään. taivutus säde | >= 300 x kuidun halkaisija |
| Laukaisu | yksi objektiivi jaettuna kolmen linjan kesken |
| Ko-linjarisuus tarkastuspisteessä | säädetty rakentamasi laukaisukokoonpanon mukaan Suunnittelusi mukaan |
Kuori- ja näytenesteet Nestetekniikka
Asettaa viipymäajan, ja viipymäaika määrittää fotonibudjetin. Solu, joka kulkee 10 µm:n pisteen läpi nopeudella 1 m/s, on säteessä 10 µs; kaksinkertaista virtausnopeus ja jokainen tapahtuma menettää puolet fotoneistaan, jotka vain laseri voi palauttaa. Tämä on kytkentä, joka ratkaisee, riittääkö 25 mW linja vai tarvitseeko suunnittelu huippuluokan.
| Viipymäaika säteessä | 10 us 10 um pisteellä 1 m/s nopeudella |
|---|---|
| Ytimen halkaisija tarkastuspisteessä | säädetty suuttimen ja suojuksen näytetiheyden suhteen mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Virtausnopeus | säädetty tarvitsemasi tapahtumataajuuden mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Näytteen ja suojuksen paine | säädetty rakentamiesi nestekanavien mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Jätteen käsittely | määräytyy analyysin ja sijainnin mukaan Suunnittelusi mukaan |
Virtaussolu Kysely
Asettaa geometrian, johon loput optiikasta rakennetaan. Kuwetin seinämän paksuus ja pintalaatu määräävät, kuinka paljon virityssäteilyä hajaantuu keräyspolulle; sen sijainti määrittää, mihin vyötärön ja objektiivin on sijoituttava; ja se on osa, jota on vaikein muuttaa myöhemmin, minkä vuoksi virtauskenno valitaan yleensä ennen sitä ympäröivää optiikkaa.
| Viritysviivat kohdistettuna siihen | 405 / 488 / 638 nm |
|---|---|
| Kyselypiste | yksi piste, kaikki kolme linjaa ko-aksiaalisia |
| Vyötärön halkaisija | säädetty laukaisutavoitteen mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Kyvetin geometria ja seinämän paksuus | säädetty hankkimasi virtauskennon mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Häiriösiirtyvä valon lähde, joka saavuttaa keräyspolun | säädetty kyvetin ja säteenpoistimen mukaan Suunnittelusi mukaan |
Keräysoptiikka Optinen polku
Määrittää, mikä väri havaitaan milläkin ilmaisimella. Kaistasuodatin kirjoitetaan keskikohta yli leveys - 530/30 päästä 515-545 nm - ja ikkuna pitää asettaa värin emissiotipulle, ei koskaan laserlinjalle. Dikrootti, joka erottaa 405 nm violetin aiheuttamasta fluoresenssista, on eri osa kuin se, joka erottaa 638 nm, minkä takia eksitaatiolinjat valitaan ennen suodatosarjan asettelua.
| Keräyskulma | 90 astetta säteeseen nähden |
|---|---|
| Tyypilliset kaistanpäästöikkunat | 450/50, 530/30, 585/42, 695/40, 780/60 nm |
| Virityksen esto | säädetty rakentamasi suodatinpinon mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Dikroinen jakaa aallonpituudet | säädetty väriainepaneelin mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Pitkäpäästösuodatin tandemkanaville | säädetty käyttämiesi tandemiväriaineiden mukaan Suunnittelusi mukaan |
Detektorit Havainto
Vahvistus, pimeävirta ja ylimääräinen kohina määrittävät himmeimmän väriaineen, jonka paneeli pystyy kantamaan. Katalogin piipohjaiset APD:t reagoivat aallonpituuksilla 400 nm - 1100 nm, mikä kattaa koko näkyvän fluoresenssialueen; se, otetaanko yksi niistä fotomultiplaattorin tilalle tietyssä kanavassa, riippuu fotonien määrästä tapahtumaa kohden, ei siitä, sopiiko teknologia aallonpituuteen.
| Vastespektri | 400 - 1100 nm |
|---|---|
| Aktiivinen halkaisija | 230 um |
| Vastekyky | 80 A/W @ M=100 |
| Pimeävirta | 0.4 nA @ M=100 |
| Optimaalinen vahvistus | 100 |
| Vastesuunta | 0.5 ns |
| Käänteisen jännitteen hajoamispiste | 100 - 200 V |
| Jännitetemperatuurikerroin | 1.1 V/C |
| Kanavien määrä | säädetty väriainepaneelin mukaan Suunnittelusi mukaan |
Signaalin hankinta Elektroniikka
Asettaa kohinatason ja dynaamisen alueen, jotka yhdessä päättävät, onko paneelin himmin kanava todellinen signaali vai vahvistimen puhetta. Sen on myös pidettävä jokaisen detektorin esijännite: APD-kanavat toimivat 100 - 200 V:lla 1,1 V/K hajoamiskertoimella, joten esijännitesilmukka ilman lämpötilan kompensaatiota muuttaa vahvistusta pois kalibroinnista, joka asetettiin 25 °C:ssa.
| Viipymäaika, jonka etupään on katettava | 10 us 10 um pisteellä 1 m/s nopeudella |
|---|---|
| APD jännite | 100 - 200 V |
| APD jännitevahvistuksen kompensointi | 1.1 V/C |
| Kanavien määrä | säädetty väriainepaneelin mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Näytteenottotaajuus | säädetty suunnittelemasi pysähdysaika mukaan Suunnittelusi mukaan |
| Dynaaminen alue | säädetty paneelin kirkkaimman ja himmeimmän väriaineen mukaan Suunnittelusi mukaan |
Kotelointi Mekaaninen
Lämpösuunnittelu, pääasiassa. Kolme lukua määrää sen: kytkinlinjat ajautuvat 0,3 nm per kelvin, kaistanpäästöikkuna on kymmeniä nanometrejä leveä, ja APD:n purkausjännite liikkuu 1,1 V per kelvin. Kymmenen kelviniä kotelon lämpötilan nousua käyttää 3 nm 30 nm ikkunasta ja 11 V 100–200 V jännitteestä; kumpikaan ei ole kohtalokasta, mutta molemmat ovat palautettavissa vain, jos runko tekee niistä ennustettavia.
| Lähteiden aallonpituuden muutos | 0,3 nm/K kaikilla kolmella viivalla |
|---|---|
| Ikkuna kulutettu 10 K:n kotelokorotuksella | 3 nm 30 nm kaistanpäästöstä |
| APD jännitteen hitaus | 1,1 V/K APD-kanavilla |
| Työpöydän jäykkyys | määräytyy kohdistuksen mukaan, jonka täytyy pysyä Suunnittelusi mukaan |
| Suojaus ja EMC | säädetty etupään kohinan tason mukaan Suunnittelusi mukaan |
Jokainen tämän sivun parametriarvo on vedetty luettelotietueesta, joka hahmontaa linkitetyn tuotesivun, joten nämä kaksi eivät voi olla eri mieltä.
Osat näiden parametrien takana
Jokainen alla oleva kuva luetaan samasta luettelotietueesta, joka tekee tuotesivun. Mitään tällä sivulla ei ole kirjoitettu uudelleen.
Kolme linjaa, joihin tämä sivu perustuu
405, 488 ja 638 nm, kaikki yksimuotoinen pigtailed ja kaikki samassa koaksiaalisessa kotelossa. Väriautomaattipaneeli päättää, mitä tarvitset; viipymäaika ja ilmaisija päättävät, kuinka paljon tehoa himmeimmän kanavan pitää nähdä.
Linjoja molemmin puolin
Paneeli harvoin rajoittuu kolmeen väriin. 450 nm on violetin viivan lyhyempi naapuri, 520 nm on lähin vihreä 561 nm viivalle, jonka useimmat paneelit ilmoittavat, ja 660 nm ulottuu pidemmälle kauas punaiseen kuin 638 nm.
Havaitsemispuoli
Piin APD:t, joiden vaste on 400 - 1100 nm, kattavat koko näkyvän fluoresenssialueen. Se, korvaako joku niistä fotomultiplaattorin tietyssä kanavassa, riippuu fotonien määrästä tapahtumaa kohden, vahvistuksesta ja pimeävirtauksesta – ei siitä, sopiiko teknologia aallonpituuteen.
Suodatinpinon rakentaminen
Neljän värin keräyspolun kohdistaminen on helpompaa säteen avulla, jonka näet. Nämä ovat näkyvät päät, joita säilytämme penkille, ja aallonpituudet, joita ne edustavat.
Kolme kuitua tekee suurimman osan työstä
Suodata luettelo kuitukytketyn kategorian mukaan ja kolme tällä sivulla olevaa linjaa tulevat takaisin yksimuotoisina modulaatteina: 405 nm violetin väriaineille, 488 nm FITC:lle ja PE:lle, 638 nm APC:lle ja kaukovermeille tandemväriaineille. Valitsimella ei ole vielä sytometria-sovellusta - lähetä meille paneeli käyttämistäsi väriaineista, niin työskentelemme takaisin emitointivälien kautta linjoihin ja tehoihin.
Lähetä meille väriainepaneeli, ei osanumeroa
Jokainen tämän sivun rivi on valittu emissioikkunaa vastaan. Kerro meille, mitkä väriaineet paneelissasi on tunnistettava, niin tulemme takaisin esittämällä niille vaadittavat eksitaatioaallot, niiden tarvitseman tehon ja suodattimet, joita ne edellyttävät.