فلو سائٹومیٹری کی توڑ پھوڑ
فلو سائیٹو میٹر کی اناتومی
ایک سائٹو میٹر وہ خوردبین ہے جو تصویر کو دیکھنے سے انکار کرتی ہے۔ یہ سیلز کو ایک وقت میں ایک سیل لے کر لیزر فوکس کے پاس سے گزارتی ہے اور ہر واقعے میں فوٹونز کی گنتی کرتی ہے، اس لیے آلے میں ہر انتخاب واقعی اس بات کا انتخاب ہے کہ ایک سیل لیزر بیم چھوڑنے سے پہلے کتنے فوٹونز پیدا کر سکتا ہے۔ سامان کی فہرست میں سے ایک حصہ منتخب کریں اور اسے کٹ اوے پر ڈالیں؛ ہر پیرامیٹر کے ساتھ کیٹلاگ پارٹ نمبرز ہوتے ہیں جو اسے لے کر چلتے ہیں۔
- 1مواد کے بل سے ایک حصہ چنیں۔
- 2اسے ماڈیول پر چھوڑیں، یا صرف کارڈ پر کلک کریں۔
- 3اس کا کام، اس کے پیرامیٹرز اور ان کے پیچھے حصہ نمبر پڑھیں۔
مواد کا بل
ہر حصہ، ایک نظری بجٹ۔ ایک کارڈ کو تصویر پر گھسیٹیں، یا اس پر کلک کریں - اس کے ساتھ والا پینل اس حصے کے پیرامیٹرز سے بھر جاتا ہے۔
ایک حصہ یہاں گھسیٹیں۔ یا مواد کے بل میں کارڈ پر کلک کریں۔
ایک تعلیمی کٹ اوے، اسمبلی ڈرائنگ نہیں۔ بائیں طرف لیزر، ان کے اوپر فلوڈکس، مرکز میں فلو سیل اور اس کا انٹروگیشن پوائنٹ، دائیں طرف فلٹر اور ڈیٹیکٹر سیڑھی، نیچے ایکوزیشن بورڈ۔
اجزاء کی پوزیشنیں ایک تدریسی خاکہ ہیں، نہ کہ اسمبلی ڈرائنگ: جگہ کا تعین اور پھٹنے والا منظر اشارے ہیں۔ پیرامیٹر کی قدریں منسلک تفصیلات کی ہیں۔
ہر حصہ، پیرامیٹر کے لحاظ سے پیرامیٹر
وہی نمبر جو انٹرایکٹو ویو دکھاتا ہے، جدولوں میں آپ پڑھ سکتے ہیں، تلاش کر سکتے ہیں اور حوالہ دے سکتے ہیں۔
405 نینو میٹر وایلیٹ لیزر تحریکی ذریعہ
یہ سیٹ کرتا ہے کہ ایک وایلیٹ لیبل والے سیل کتنے فوٹون خارج کر سکتے ہیں۔ اہم بات یہ نہیں کہ ابتدائی طاقت کتنی ہے بلکہ یہ ہے کہ فائبر میں کون سی طاقت برقرار رہتی ہے، یہ ایک رن کے دوران مستحکم رہتی ہے یا نہیں، اور لائن فلٹرز کے حوالے سے کہاں واقع ہے: 405 nm پر 2 nm چوڑی لائن فی کیلون 0.3 nm ڈھلتی ہے، اس لیے کیس کا درجہ حرارت ڈائی کے ابسورپشن بینڈ سے تحریک کو بہت پہلے ہی خارج کر دیتا ہے اس سے پہلے کہ کوئی چیز آپٹکس میں حرکت کرے۔
| مرکزی طول موج | 405 nm |
|---|---|
| آؤٹ پٹ طاقت، CW | 70 mW |
| اس لائن پر دی جانے والی طاقت | 70 mW | 80 mW |
| اسپیکٹرم چوڑائی (FWHM) | 2 nm معمولی |
| طول موج درجہ حرارت کا کوفیشینٹ | 0.3 nm/K |
| فائبر کور قطر | 3 um |
| عددی سوراخ | 0.13 |
| کنیکٹر | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| ڈائیز جس لائن کے لئے منتخب کی گئی ہیں | BV421، پیسیفک بلیو، DAPI (مثالیں) |
| عام اخراج کی ونڈوز | 450/50 نینو میٹر، 525/50 نینو میٹر (مثالیں) |
488 نینو میٹر نیلا لیزر تحریکی ذریعہ
ہر نیلے متحرک چینل کے لیے بیک وقت فوٹون بجٹ سیٹ کرتا ہے۔ چونکہ تین ونڈوز ایک لائن شیئر کرتی ہیں، طاقت ان میں تقسیم ہوتی ہے اور سب سے مدھم ڈائی مواصفات کا فیصلہ کرتی ہے: کیٹلاگ کی 25 mW لائن ایک اچھی طرح لیبل شدہ پینل کے لیے کافی ہے، اور چینل پر حد عام طور پر فلٹر اور ڈیٹیکٹر ہوتی ہے نہ کہ لیزر۔
| مرکزی طول موج | 488 nm |
|---|---|
| آؤٹ پٹ طاقت، CW | 25 mW |
| اسپیکٹرم چوڑائی (FWHM) | 2 nm معمولی |
| طول موج درجہ حرارت کا کوفیشینٹ | 0.3 nm/K |
| فائبر کور قطر | 3 um |
| عددی سوراخ | 0.12 |
| کنیکٹر | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| ڈائیز جس لائن کے لئے منتخب کی گئی ہیں | FITC، Alexa Fluor 488، PE، PerCP (مثالیں) |
| عام اخراج کی ونڈوز | 530/30 نینو میٹر، 585/42 نینو میٹر، 695/40 نینو میٹر (مثالیں) |
638 نم میٹر سرخ لیزر تحریکی ذریعہ
سیٹ کرتا ہے کہ پینل دور سرخ میں کتنا آگے پہنچ سکتا ہے۔ وضاحتیں عموماً 640 نینو میٹر لائن پر مبنی ہوتی ہیں؛ 638 نینو میٹر وہ لائن ہے جو کیٹلاگ میں درج ہے اور یہ اسی جذب بینڈ میں ہے، اس لیے 640 نینو میٹر کے لیے بنائی گئی فلٹر اسٹیک بغیر تبدیلی کے کام کرتی ہے۔ جو سرخ لائن برداشت نہیں کرتی وہ یہ کہ ایک ڈارک اتنا قابل قبول ڈیٹیکٹر ہو: 660/20 اور 780/60 ونڈوز وسیع ہیں، اور چینل کی حد ڈیٹیکٹر کا ڈارک کرنٹ ہے، نہ کہ پراکشی۔
| مرکزی طول موج | 638 nm |
|---|---|
| آؤٹ پٹ طاقت، CW | 70 mW |
| اس لائن پر دی جانے والی طاقت | 70 mW | 100 mW |
| اسپیکٹرم چوڑائی (FWHM) | 2 nm معمولی |
| طول موج درجہ حرارت کا کوفیشینٹ | 0.3 nm/K |
| فائبر کور قطر | 4 um |
| عددی سوراخ | 0.13 |
| کنیکٹر | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| ڈائیز جس لائن کے لئے منتخب کی گئی ہیں | APC، Alexa Fluor 647، APC-Cy7 (مثالیں) |
| عام اخراج کی ونڈوز | 660/20 نینو میٹر، 780/60 نینو میٹر (مثالیں) |
فائبر ڈیلیوری آپٹیکل راستہ
انٹرویوشن پوائنٹ پر مقام اور یہ کہ تینوں لائنیں وہاں ہم خطی ہیں یا نہیں، کو سیٹ کرتا ہے۔ سنگل موڈ پگٹیل کا آؤٹ پٹ پہلے ہی فائبر کے ذریعے متعین کیا جاتا ہے: کور کا قطر اور عددی ایپرچر دباؤ کو مقرر کرتے ہیں، اور لانچ آبجیکٹو اسے فلو سیل کے سائز کے مطابق ویسٹ میں تبدیل کرتا ہے۔ اگر تینوں لائنیں چند مائیکرومیٹر کے اندر ہم خطی نہ ہوں، تو ایک رنگ کے لیے لیبل کی گئی سیل دوسری رنگ کے لیے لیبل کی گئی سیل سے مختلف ایکسائٹیشن شدت دیکھے گی۔
| فراہم کردہ لائنیں | 405 / 488 / 638 nm |
|---|---|
| فائبر کی قسم | سنگل موڈ موڈ |
| فائبر کور قطر | 3 um |
| عددی سوراخ | 0.12 |
| فائبر کی لمبائی | 100 سینٹی میٹر (زیادہ سے زیادہ 110 سینٹی میٹر) |
| کنیکٹر | FC/PC, SMA905, FC/APC |
| کم از کم موڑ کا رداس | >= 300 x ریشے کے قطر |
| لانچ | تین لائنوں کے لیے ایک ہی آبجیکٹو |
| انکوائری پوائنٹ پر کو-لینیریٹی | لانچ اسمبلی سے مقرر کیا گیا جو آپ بناتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
شیٹھ اور نمونہ فلوڈکس سیالیات
ڈویل ٹائم کو سیٹ کرتا ہے، اور ڈویل ٹائم فوٹون بجٹ کو سیٹ کرتا ہے۔ 1 m/s کی رفتار سے 10 μm دائرے سے عبور کرنے والا سیل بیم میں 10 µs کے لیے ہوتا ہے؛ اگر فلو کی رفتار دوگنی ہو جائے تو ہر ایونٹ اپنے فوٹونز کا آدھا حصہ کھو دیتا ہے، جو صرف لیزر ہی واپس دے سکتا ہے۔ یہ وہ جوڑ ہے جو فیصلہ کرتا ہے کہ کیا 25 mW لائن کافی ہے یا ڈیزائن کو اعلیٰ حد کی ضرورت ہے۔
| بییم میں ڈویل ٹائم | 1 m/s پر 10 um مقام پر 10 us |
|---|---|
| انٹروگیشن پوائنٹ پر کور کا قطر | نزول اور شیٹ ٹو سیمپل ریشو سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| فلو کی رفتار | اس ایونٹ کی شرح سے مقرر کیا گیا جو آپ کو چاہیے اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| نمونہ اور شیٹھ دباؤ | فلوڈکس سے مقرر کیا گیا جو آپ بناتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| فضلہ کی ہینڈلنگ | اسے اساسی اور مقام کے حساب سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
فلو سیل انٹروگیشن
وہ جیومیٹری سیٹ کرتا ہے جس پر باقی آپٹکس تعمیر کی جاتی ہے۔ کیویٹ کی دیوار کی موٹائی اور سطح کا معیار طے کرتا ہے کہ کتنا تحریک روشنی جمع کرنے کے راستے میں منتشر ہوگی؛ اس کی پوزیشن یہ مقرر کرتی ہے کہ ویسٹ اور ابجیکٹو کہاں پہنچنے ہیں؛ اور یہی وہ حصہ ہے جسے بعد میں تبدیل کرنا سب سے مشکل ہوتا ہے، اسی وجہ سے فلو سیل عام طور پر اس کے گرد موجود آپٹکس کے انتخاب سے پہلے چن لیا جاتا ہے۔
| تحریک کی لائنیں اس میں مرکوز | 405 / 488 / 638 nm |
|---|---|
| انٹروگیشن پوائنٹ | ایک نقطہ، تینوں لائنیں ہم خطی |
| کمر قطر | لانچ ابجیکٹیو سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| کیوویٹ کی جیومیٹری اور دیوار کی موٹائی | فلور سیل سے مقرر کیا گیا جو آپ سورس کرتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| جمع کرنے کے راستے تک پہنچنے والی غیر ضروری تحریک روشنی | کیوٹویٹ اور بیم ڈمپ سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
کلیکشن اوپٹکس آپٹیکل راستہ
فیصلہ کرتا ہے کہ کون سا رنگ کون سے ڈیٹیکٹر سے نظر آئے گا۔ ایک بینڈ پاس فلٹر کو سینٹر اوور وِڈتھ کے طور پر لکھا جاتا ہے - 530/30 515 سے 545 nm پاس کرتا ہے - اور ونڈو کو رنگ کے اخراج کے چوٹی پر رکھنا چاہیے، کبھی لیزر لائن پر نہیں۔ 405 nm کو وائلٹ ٹرگرڈ فلوروسینس سے جدا کرنے والا ڈائیکروک مختلف پرزہ ہے اس سے جو 638 nm کو جدا کرتا ہے، اسی لیے فلٹر اسٹیک ترتیب دینے سے پہلے تحریک لائنیں منتخب کی جاتی ہیں۔
| کلیکشن زاویہ | بیَم کے لیے 90 ڈگری |
|---|---|
| عام بینڈ پاس ونڈوز | 450/50, 530/30, 585/42, 695/40, 780/60 nm |
| تحریک کی مستردگی | فلٹر اسٹیک سے مقرر کیا گیا جو آپ بناتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| ڈائکرک تقسیم طول موج | رنگ پینل سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| ٹنڈم چینلز کے لیے طویل فاصلے کی کٹ | ٹینڈم ڈائز سے مقرر کیا گیا جو آپ چلاتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
ڈیٹیکٹرز ڈیٹیکشن
گین، ڈارک کرنٹ اور زیادہ شور اس بات کا فیصلہ کرتے ہیں کہ پینل سب سے مدھم رنگ کو کس حد تک لے جا سکتا ہے۔ کیٹلاگ کے سلیکان APDs 400 نینومیٹر سے 1100 نینومیٹر تک ردعمل کرتے ہیں، جو کہ پورے مرئی فلوئورسنس بینڈ کو احاطہ کرتا ہے؛ کہ آیا ان میں سے کوئی ایک کسی دیے گئے چینل میں فوٹوملٹیپلائر کی جگہ لے سکتا ہے، یہ واقعے میں فوٹونز کی تعداد کا سوال ہے، نہ کہ یہ کہ ٹیکنالوجی طول موج کے مطابق ہے یا نہیں۔
| جوابی اسپیکٹرم | 400 - 1100 nm |
|---|---|
| فعال قطر | 230 um |
| ردعمل کی حساسیت | 80 A/W @ M=100 |
| ڈارک کرنٹ | 0.4 nA @ M=100 |
| بہترین فائدہ | 100 |
| ردعمل کا وقت | 0.5 ns |
| الٹی بریک ڈاؤن وولٹیج | 100 - 200 V |
| وولٹیج درجہ حرارت کا کوفیشینٹ | 1.1 V/C |
| چینل کی تعداد | رنگ پینل سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
سگنل حاصل کرنا الیکٹرانکس
یہ شور کی حد اور متحرک حدود (ڈائنامک رینج) مقرر کرتا ہے، جو مل کر فیصلہ کرتے ہیں کہ پینل میں سب سے مدھم چینل حقیقی سگنل ہے یا ایمپلیفائر کی آواز۔ اسے ہر ڈیٹیکٹر کے بائس کو بھی رکھنا ہوتا ہے: APD چینلز 100 - 200 وولٹ پر چلتے ہیں اور 1.1 وولٹ/ک جی بریک ڈاؤن کوفیشنٹ رکھتے ہیں، اس لیے بغیر درجہ حرارت کی تلافی کے بائس لوپ 25 C پر سیٹ ہونے والی کیلیبریشن سے گین کو دھکیل دیتا ہے۔
| ڈویل ٹائم جو فرنٹ اینڈ کو کور کرنا ہے | 1 m/s پر 10 um مقام پر 10 us |
|---|---|
| APD بایس | 100 - 200 V |
| APD بایس کی تلافی | 1.1 V/C |
| چینل کی تعداد | رنگ پینل سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| نمونہ کی شرح | اس وقت سے مقرر کیا گیا جو آپ ڈیزائن کرتے ہیں اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| ڈائنامک رینج | پینل میں سب سے روشن اور سب سے مدھم رنگ سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
ہاؤسنگ میکانیکی
زیادہ تر حرارتی ڈیزائن۔ تین اعداد اسے متعین کرتے ہیں: تحریک لائنیں فی کیلون 0.3 نم ڈریفت کرتی ہیں، ایک بینڈپاس ونڈو چند دہائیوں نم چوڑی ہوتی ہے، اور APD کا بریک ڈاؤن وولٹیج فی کیلون 1.1 وولٹ حرکت کرتا ہے۔ کیس کے دس کیلون بڑھنے سے 30 نم کی ونڈو کے 3 نم اور 100 - 200 وولٹ بایس کے 11 وولٹ خرچ ہوتے ہیں؛ یہ دونوں مضر نہیں ہیں، لیکن دونوں صرف اسی صورت میں درست ہو سکتے ہیں جب چیسس انہیں پیش گوئی کے قابل بنائے۔
| ذرائع کا ویولینتھ ڈرفٹ | تمام تین لائنوں پر 0.3 nm/K |
|---|---|
| 10 K کیس رائز سے کھڑکی استعمال ہوئی | 30 nm بینڈ پاس میں سے 3 nm |
| APD بایس ڈرفٹ | 1.1 V/K APD چینلز پر |
| بینچ کی سختی | اس ترتیب سے مقرر ہے جس کو آپ برقرار رکھنا ہے اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
| شیلڈنگ اور ای ایم سی | فرنٹ اینڈ نوائس فلور سے مقرر کیا گیا اپنے ڈیزائن کے مطابق سیٹ کریں۔ |
اس صفحہ پر ہر پیرامیٹر کی قدر کیٹلاگ ریکارڈ سے کھینچی گئی ہے جو لنک شدہ پروڈکٹ کے صفحے کو پیش کرتی ہے، اس لیے دونوں متفق نہیں ہو سکتے۔
ان پیرامیٹرز کے پیچھے حصے
نیچے دی گئی ہر تصویر کو اسی کیٹلاگ ریکارڈ سے پڑھا جاتا ہے جو پروڈکٹ کا صفحہ پیش کرتا ہے۔ اس صفحہ پر کچھ بھی دوبارہ ٹائپ نہیں کیا گیا ہے۔
یہ تین لائنیں جن پر یہ صفحہ بنایا گیا ہے
405، 488 اور 638 نینو میٹر، سب سنگل موڈ پیگ ٹیل کے ساتھ اور سب ایک ہی کو ایکسیئل کیس میں۔ ڈائی پینل فیصلہ کرتا ہے کہ آپ کو ان میں سے کون سا چاہیے؛ ڈویل وقت اور ڈیٹیکٹر فیصلہ کرتے ہیں کہ سب سے کم شعاع والا چینل کتنی طاقت دیکھنے کی ضرورت ہے۔
دونوں طرف کی لائنیں
ایک پینل شاذ و نادر ہی صرف تین رنگوں پر رکتی ہے۔ 450 نینو میٹر وایلیٹ لائن کا چھوٹا پڑوسی ہے، 520 نینو میٹر سبز کے قریب ترین ہے اس 561 نینو میٹر لائن کے جو زیادہ تر پینلز متعین کرتے ہیں، اور 660 نینو میٹر 638 نینو میٹر سے زیادہ دور ریڈ میں پہنچتا ہے۔
پہچان کرنے والا حصہ
400 - 1100 این ایم ریسپانس والے سلکان اے پی ڈیز پوری مرئی فلوروسینس بینڈ کو کور کرتے ہیں۔ اس میں سے کوئی ایک دیے گئے چینل میں فوٹوملٹی پلائر کی جگہ لے رہا ہے یا نہیں، یہ واقعے فی فوتونز، گین اور ڈارک کرنٹ کا سوال ہے — اس بات کا نہیں کہ ٹیکنالوجی طول موج سے میل کھاتی ہے یا نہیں۔
فلٹر اسٹیک بنانا
چار رنگ کے کلیکشن راستے کی سیدھ ایک دیکھنے کے قابل بییم کے ساتھ آسان ہے۔ یہ وہ مرئی ہیڈز ہیں جو ہم بینچ کے لیے رکھتے ہیں، اور وہ طول موج جو یہ ظاہر کرتے ہیں۔
تین فائبرز زیادہ تر کام کرتے ہیں
کتالوگ کو فائبر سے منسلک کیٹیگری کے ذریعے فلٹر کریں اور اس صفحے کے ارد گرد بنی تین لائنیں سنگل-موڈ پگیٹیلڈ ماڈیول کے طور پر واپس آئیں: وائلٹ ڈائز کے لیے 405 این ایم، FITC اور PE کے لیے 488 این ایم، APC اور فارو ریڈ ٹینڈمز کے لیے 638 این ایم۔ سلیکٹر کے پاس ابھی کوئی سائٹومیٹری درخواست نہیں ہے - ہمیں وہ ڈائز پینل بھیجیں جو آپ بنا رہے ہیں اور ہم اخراج کی ونڈوز سے لائنز اور پاورز تک واپس کام کریں گے۔
ہمیں ڈائی پینل بھیجیں، حصے کا نمبر نہیں
اس صفحے پر ہر لائن ایک ایمیشن ونڈو کے خلاف منتخب کی گئی تھی۔ ہمیں بتائیں کہ آپ کے پینل میں کونسی ڈائیز کو حل کرنے کی ضرورت ہے اور ہم آپ کو ایکسیٹیشن ویولینتھس، ان کی ضروری طاقت اور متعلقہ فلٹرز کے ساتھ واپس آئیں گے۔